雌激素六項檢查通常情況下需要空腹進行。由於雌孕激素在女性月經期變化不同，建議生殖激素六項檢查需要在月經見紅的第2-5天之間空腹抽血化驗，才能更準確判斷激素水平。此時雌孕激素比例會達到一定指標，有助於醫生判斷雌孕激素是否達標。

特殊情況下生殖激素六項檢查無需空腹，受檢者可以在進食少量碳水化合物之後的半個小時內進行檢查。