25-羥基維生素D可檢查人體是否缺乏維生素D，是否缺乏維生素D主要金標準是檢測血液25-羥基維生素D濃度。如果低於30ng/dl，常定義為維生素D不足。如果低於20ng/dl，常定義為維生素D缺乏。如果低於10ng/dl，多定義為維生素D嚴重缺乏。

實際人體合成維生素D主要靠皮膚合成，由於現代人在戶外活動時間比較短，也很少做戶外體力活動，故很多人都會缺乏維生素D。維生素D缺乏可以導致骨代謝問題，如在成年人可以導致骨質疏鬆，嚴重維生素D缺乏可以導致骨軟化。對於幼兒或成長期兒童，可能會導致佝僂病。所以，對於有危險因素或有症狀人群，在臨床中會檢測血25-羥基維生素D評估是否缺乏維生素D。