多發性硬化要詢問患者的詳細病史、詳細體檢，影像學檢查對多發性硬化症患者相對重要，需頭顱MRI、脊柱MRI檢查，能清楚反映病變，對鑑別診斷起很大作用。除了其他疾病外，腰椎穿刺也是必要的檢查，可以做肌電圖，比如視覺誘發電位。
此外，還可檢測血清水通道蛋白，排除視神經脊髓炎譜系疾病。簡言之，多發性硬化症有許多檢查，其中最重要的是核磁共振成像、腰椎穿刺。