如果要確診支原體肺炎，需綜合臨床表現、X線表現及血清學檢查結果作出診斷。支原體肺炎的突出症狀為陣發性乾咳，亦可咳少量黏痰，咳嗽持續時間較久。X線檢查顯示肺部多種形態的浸潤影，呈節段性分佈。此外要做血清IgM抗體檢測，如果抗體大於1：64或者恢復期抗體滴度有4倍的升高，就可以診斷為支原體肺炎，還可以做冷凝集試驗，如果為陽性，並且滴度大於1：32也可以診斷為支原體肺炎。